在线留言 网站地图 RSS|XML 您好,欢迎访问老上光仪器总厂网站!
老上光仪器总厂

北京教委定点合作服务商 | 精密仪器行业协会会员单位专注显微镜领域研发生产50年

咨询热线-400-811-7895
联系我们Contact us
全国咨询热线400-811-7895

老上光仪器总厂

公司地址:北京市海淀区上地信息路信息产业三街

联系电话:152 0116 0776

公司邮箱:2335287164@qq.com

常见问题

朝阳细胞内的物质运输系统实验步骤之细胞转染!

作者: 发布时间:2022-07-02 21:05:59点击:3074

信息摘要:

大家好,这里是老上光显微镜知识课堂,在这里你可以学到所有关于显微镜知识,好的,请看下面文章:细胞内的物质运输系统实验步骤

大家好,这里是老上光显微镜知识课堂,在这里你可以学到所有关于显微镜知识,好的,请看下面文章:
细胞内的物质运输系统实验步骤之细胞转染!
细胞转染(transfection)暨蛋白质外释作用:VSVG-GFP与ARLI-QL质体(plasmid)共同转染
1. 取4×104个COS-7细胞至12-well plate的单一培养井(well)中,经隔夜培养约16~24小时。
2. 取100μl OPTI-MEN(ㄧ种不含胎牛血清的培养液)及0.5μg ARL1QL质体、0.5μg VSVG-GFP质体混合,取100μl OPTI-MEN 及1μl lipofectamin(ㄧ种脂小体)混合,将二者均匀混合,静置30分钟。
3. 取出原培养液,并加入100μl OPTI-MEN至每一个培养井后,将含有ARL1QL、VSVG-GFP及脂小体的混合液加入培养井,放入二氧化碳培养箱5小时。
4. 抽出混合液,更换正常之培养液(含10% FBS(胎牛血清)/DMEM),继续培养36-48小时。
5. 取出细胞培养盘后,以 PBS 清洗一次,再以浓度4 % 的福马林进行固定15分钟。
6. 以PBS清洗一次,加入含有0.01 % Triton X-100、0.05 % SDS的清洁剂,静置15分钟,以增加细胞膜的通透性。
7. 以PBS清洗二次,加入含有saponin、BSA的阻断缓衝液,静置30分钟,以阻断抗原与抗体间非专一性的结合。
8. 取出阻断缓衝液后,加入抗ARL1的抗体(来自兔子的多株抗体;一级抗体),静置30分钟。
9. 以 PBS 清洗四次,加入含有萤光标定的二级抗体(抗兔子之免疫球蛋白,来自山羊;红光),以及 DNA 染剂 Hochest33258,静置30分钟。
10. 以PBS清洗四次,待自然风乾后,于载玻片上滴入封片液,进行封片。
11. 以萤光显微镜观察标示蛋白质在细胞内的分布情形。
网站网友点击量更高的文献目录排行榜: 点此链接 关注页面底部公众号,开通以下权限: 一、获得问题咨询权限。 二、获得工程师维修技术指导。 三、获得软件工程师在线指导 toupview,imageview,OLD-SG等软件技术支持。 四、请使用微信扫描首页底部官主账号!
本文标签:
在线客服
联系方式

热线电话

400-811-7895

上班时间

周一到周五

公司电话

152 0116 0776

二维码
线